硅胶破碎法抽提真菌染色体DNA张桂敏，唐文杰，班静，马立新（湖北大学生命科学学院，湖北武汉430062）学，由可以看出，染色体DNA主带在23kb以上，很少有降解的小碎片。

　　3.2抽提真菌染色体DNA的紫外吸收光谱测定经亚精胺纯化的DNA经稀释后进行紫外吸收光谱测定，其紫外吸收A260/A280比值为1.823，DNA产量可稳定在0. 3染色体DNA酶切效果将抽提并纯化的3种DNA，分别用3种平端限制性内切酶进行酶解，酶解效果见的2~10泳道。电泳结果显示酶解后的DNA片段从大到小分布均，说明DNA能被限制酶有效的切开。

　　3.4PCR扩增结果用ITS1和ITS4引物对3种DNA进行PCR扩增，扩增产物经电泳，均在500bp附近呈现清晰的条带，扩增效果见。

　　4讨论近20年来，真菌分子生物学研究取得了许多进展，人们开始从真菌中获得基因资源或者研究基因的功能，在已知目的基因片段的前提下，利用GWPCR法克隆真菌基因，克服了RACE克隆方法5‘端效率不高的问题，更简便易行，但是如果没有大量高质量的DNA，这种方法就会因多次测序而增加成本。因此，发展简便易行的真菌高质量染色体DNA提取方法至关重要，目前存在和使用的丝状真菌染色体DNA提取方法步骤大体相似，差别主要在于采用什么方法破坏丝状真菌细胞壁和如何对DNA进行纯化。在破壁方面主要采用液氮研磨破壁，酶解形成原生质体法，玻璃珠机械破壁法以及氯化苄法等；在DNA纯化上，比较简便的有苯酚/氯仿法和LiCl法，但是上述抽提总DNA主要是做PCR的模板或者做Southern印迹，对DNA的量和纯度要求不高。

　　我们在和使用这些不同提取方法的基础上，主要从提高所得DNA样品的质量和产量两个方面进行改进，利用国产硅胶代替进口玻璃珠并与液氮冷冻研磨破菌结合起来，提高了破菌效率，能稳定地得到大量的DNA，不仅适用于丝状真菌，同样适用于平菇等大型真菌；在DNA的纯化方面采取亚精胺法取得了良好的效果。

　　采用该方法所获得的高分子量DNA在进行基因组步行PCR时，所得PCR产物一次测序就是目的片段，而没用亚精胺法纯化的DNA在进行步行时往往要重复几次测序才能得到目的片段。另外碑开究发展的抽提真菌总DnA的方法r除特别适晶于mGWe.法克隆基因，也完全适于进行其它各类分子生物学研究工作。